艾滋病是嚴(yán)重威脅我國人民健康的疾病之一，目前在我國流行趨勢依然嚴(yán)峻。衛(wèi)生部、聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署和世界衛(wèi)生組織聯(lián)合評估顯示，截至2009年底，累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者和艾滋病病人32.6萬例，其中艾滋病病人10.7萬例，死亡報(bào)告5.4萬例，估計(jì)中國存活艾滋病病毒感染者和病人約74萬人，其中艾滋病病人為10.5萬人。HIV感染的實(shí)驗(yàn)室檢測在HIV感染的診斷、疾病進(jìn)展的監(jiān)測、抗病毒療效觀察和耐藥監(jiān)測中至關(guān)重要，是艾滋病防治工作的重要基礎(chǔ)。目前臨床檢測內(nèi)容包括HIV抗體、P24抗原、HIV病毒載量、HIV耐藥檢測、CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等。為滿足目前艾滋病檢測工作的實(shí)際需要，2009年9月中國疾病預(yù)防控制中心頒布了《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年版）》，對2004年版的內(nèi)容進(jìn)行了修改、增補(bǔ)和完善。HIV的檢測必須遵守國家制定的《艾滋病檢測工作管理辦法》和《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年版）》（以下簡稱《規(guī)范》），嚴(yán)格進(jìn)行。

　　一、HIV抗體檢測

　　HIV抗體檢測不同于其他病原微生物的檢測，任何錯(cuò)誤的診斷，包括假陽性或假陰性，都會對被檢者甚至他人造成重要的影響。因此，HIV抗體檢測必須嚴(yán)格按照《規(guī)范》要求，由接受過專門技術(shù)培訓(xùn)并獲合格證書的技術(shù)人員在當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門審批合格的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)有嚴(yán)格的質(zhì)量保證體系。

　　HIV抗體檢測分為篩查試驗(yàn)和確證試驗(yàn)，可用于診斷（確定個(gè)體HIV感染狀況）、監(jiān)測（了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢）及血液篩查（防止輸血傳播HIV）。篩查試驗(yàn)根據(jù)檢測原理不同分為酶聯(lián)免疫吸附法、凝集法和層析法，可對血液、唾液和尿液標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)或快速檢測。臨床用于血液篩查的方法包括酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光法等，常用的為酶聯(lián)免疫法（ELISA）。自1985年第一代ELISA試劑問世以來，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，包被抗原已從一代的全病毒裂解物發(fā)展為目前以基因重組和多肽抗原包被和標(biāo)記、有著良好敏感性和特異性的三代雙抗原夾心試劑，檢測亞型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亞型。第四代ELISA可同時(shí)檢測P24抗原和HIV-1/2抗體，進(jìn)一步縮短了窗口期。此外，按《規(guī)范》要求，快速檢測由于簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測，包括明膠顆粒凝集試驗(yàn)、斑點(diǎn)ELISA、斑點(diǎn)免疫膠體金快速試驗(yàn)、艾滋病唾液檢測卡等。對用ELISA試劑或快速診斷試劑進(jìn)行的篩查實(shí)驗(yàn)如呈陰性反應(yīng)，即報(bào)告HIV抗體陰性；對呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，篩查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。篩查試劑必須是HIV-1/2混合型、經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局（SDA）注冊批準(zhǔn)、批檢合格、在有效期內(nèi)、推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性均高的試劑。

　　HIV抗體篩查呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本由于存在假陽性的可能，必須進(jìn)行確證試驗(yàn)。其方法包括免疫印跡試驗(yàn)、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)及免疫熒光試驗(yàn)，目前以免疫印跡試驗(yàn)最為常用。確認(rèn)試劑必須是經(jīng)SDA注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。免疫印跡試劑有HIV-1/2混合型和單一型，按《規(guī)范》要求，先用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測，根據(jù)《規(guī)范》中判定免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果的基本原則并參照所用試劑說明書綜合判定，無HIV抗體特異帶出現(xiàn)的報(bào)告HIV抗體陰性；出現(xiàn)HIV抗體特異帶，符合HIV-1抗體陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，則報(bào)告HIV-1抗體陽性。如出現(xiàn)HIV-2型的特異性條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2型抗體確證試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報(bào)告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報(bào)告HIV-2抗體血清學(xué)陽性，如需鑒別應(yīng)進(jìn)行核酸序列分析。如果出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定為陽性，則判為HIV抗體不確定。對HIV抗體不確定者，新版《規(guī)范》修改了隨訪的時(shí)間，將3個(gè)月的隨訪周期縮短為4周，要求在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)符合判定標(biāo)準(zhǔn)的HIV-1抗體陽性反應(yīng)，則報(bào)告陽性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。第8周時(shí)如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽性，不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。

　　為確保HIV抗體篩查的準(zhǔn)確性，在所有實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清，是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)，每次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的弱陽性對照，一般以該試劑盒臨界值（Cut off）的2-3倍為宜，可購買或由實(shí)驗(yàn)室自己制備。此外，全國各艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室需參加本省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室組織的室間質(zhì)量評價(jià)，各艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室和艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室需參加國家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室組織的室間評價(jià)，以確保HIV抗體檢測質(zhì)量。

　　二、HIV-1 P24抗原檢測

　　HIV-1 P24抗原檢測可用于HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷。P24抗原檢測一般用ELISA雙抗體夾心法試劑，試劑必須經(jīng)過SDA批準(zhǔn)注冊、在有效期內(nèi)，其陽性結(jié)果必須依據(jù)試劑說明書經(jīng)中和試驗(yàn)確認(rèn)。HIV-1P24抗原檢測的敏感性為30-90%，該結(jié)果僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診；HIV-1 P24抗原檢測陰性只表示在本試驗(yàn)中無反應(yīng)，不能排除HIV感染，臨床中一般不作為常規(guī)診斷項(xiàng)目。

　　三、HIV RNA定量測定（病毒載量檢測）及HIV核酸定性檢測

　　HIV核酸檢測可用于HIV感染的輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效判定、預(yù)測疾病進(jìn)展等。常用的HIV病毒載量檢測方法包括逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)（RT-PCR）、核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)（NASBA）、分支DNA雜交實(shí)驗(yàn)（bDNA）以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。值得注意的是，每一種HIVRNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測限，即可以測出的最低拷貝數(shù)或國際單位，RNA定量檢測時(shí)未測出不等于樣品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性檢測陰性，只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性，但不能排除HIV感染；HIV核酸檢測陽性，可作為診斷HIV感染的輔助指標(biāo)，不能單獨(dú)用于HIV感染的診斷。報(bào)告HIV核酸定量檢測結(jié)果時(shí)應(yīng)按照儀器讀數(shù)報(bào)告結(jié)果，注明使用的實(shí)驗(yàn)方法、樣品種類和樣品量，當(dāng)測定結(jié)果小于最低檢測限時(shí)，應(yīng)注明最低檢測限水平。

　　HIV核酸定性檢測也可用于HIV感染的輔助診斷，目前在分析HIV基因亞型和變異等基礎(chǔ)研究中應(yīng)用。通常使用PCR或RT-PCR技術(shù)，使用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室通用的擴(kuò)增試劑，引物可來自文獻(xiàn)或自行設(shè)計(jì)，應(yīng)盡量覆蓋所有或常見的毒株，也可使用復(fù)合引物。報(bào)告定性檢測結(jié)果時(shí)應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。此外，利用核酸檢測方法的高度敏感性，使用集合核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)和方法，對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進(jìn)行集合核酸檢測，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。

　　四、CD4+ T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

　　CD4+T淋巴細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)最重要的細(xì)胞之一。HIV以CD4+T淋巴細(xì)胞為靶細(xì)胞，感染后可導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行性下降，使機(jī)體免疫功能受損，最終因機(jī)會性感染及腫瘤而死亡。CD4+T淋巴細(xì)胞絕對值的檢測在HIV感染的以下方面發(fā)揮了重要作用：了解機(jī)體的免疫狀態(tài)以確定疾病分期、監(jiān)測疾病進(jìn)程、評估疾病預(yù)后、制定抗病毒治療及機(jī)會性感染預(yù)防性治療方案及評估抗病毒治療療效等。目前用于CD4+T淋巴細(xì)胞檢測的方法分為自動檢測方法和手工操作法。自動檢測方法包括流式細(xì)胞儀（單平臺一步法、多平臺三級程序法）和專門的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，手工操作方法則需要顯微鏡或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)設(shè)備。目前檢測CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法為流式細(xì)胞儀，可得出CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞的絕對值及占淋巴細(xì)胞的百分率。為確保檢測的準(zhǔn)確性，應(yīng)制定質(zhì)量保證計(jì)劃，建立內(nèi)部質(zhì)量控制制度，并參加室間質(zhì)量評價(jià)。

　　五、抗病毒治療的耐藥監(jiān)測

　　高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療為目前針對HIV最有效的治療，但由于HIV可產(chǎn)生自發(fā)性高頻率的基因突變，在抗病毒藥物選擇性壓力下，HIV的突變可促使HIV耐藥株的產(chǎn)生，并進(jìn)一步引起多種藥物交叉耐藥，成為遏制AIDS流行的主要障礙之一。目前常用的耐藥檢測方法包括基因型和表型HIV 耐藥檢測。當(dāng)病毒對某些藥物產(chǎn)生耐藥時(shí)，病毒基因會發(fā)生一些明確的突變，因此，可應(yīng)用病毒耐藥基因型的檢測預(yù)測某些藥物的治療效果。其方法為從患者血液標(biāo)本中分離HIV核酸物質(zhì)，進(jìn)行核酸序列分析，確定與耐藥性相關(guān)的病毒變異位點(diǎn)。在確認(rèn)變異后，與既往耐藥或交叉耐藥研究比較，間接地估計(jì)藥物耐藥情況，簡單快速，費(fèi)用低，結(jié)果分析較復(fù)雜，需由專業(yè)人員進(jìn)行�；�因型耐藥檢測方法有時(shí)并不能解釋某些耐藥突變之間的相關(guān)性，如各突變之間是否有協(xié)同或者抵抗作用。目前我國進(jìn)行的耐藥性檢測主要為基因型耐藥檢測。衛(wèi)生部指導(dǎo)建立的全國HIV耐藥性監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)可及時(shí)掌握耐藥毒株出現(xiàn)的情況以及影響因素，為國家HIV抗病毒治療提供了技術(shù)保障。表型HIV耐藥性檢測包括傳統(tǒng)的共培養(yǎng)方法和重組病毒表型檢測方法，能直接測出感染毒株對藥物的敏感度，并能揭示事先存在或交叉的耐藥情況，有利于指導(dǎo) HIV-1 感染者有效地用藥。不足之處為試驗(yàn)慢且費(fèi)用昂貴，技術(shù)要求高，多種影響因素導(dǎo)致重復(fù)性差，多需在P3級生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，因此，其在臨床上的應(yīng)用受到限制。

　　六、HIV病毒分離

　　HIV病毒培養(yǎng)及分離可用于HIV-1感染的輔助診斷。HIV病毒分離需要在P3級生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)條件及技術(shù)要求較高，目前多用于HIV相關(guān)的科學(xué)研究。

　　綜上，隨著我國艾滋病防控力度的不斷加大，對于監(jiān)測和檢測技術(shù)的要求也不斷提高，艾滋病檢測工作量日趨增加。在現(xiàn)有基礎(chǔ)上進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)室檢測的技術(shù)及質(zhì)量控制，滿足國家艾滋病防治對于監(jiān)測檢測工作的要求，是從事艾滋病檢測工作人員義不容辭的責(zé)任。

（責(zé)任編輯：林小萍）